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项目 Southern blot
服务内容 Southern Blot印迹杂交检测
服务周期 20-30工作日
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Southern Blot印迹杂交检测-DIG探针标记

 

原理：  

Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的方法。其基本原理是：具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下，可按碱基互补的原则特异性地杂交形成双链。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的含量。另外为了便于测定待测DNA分子量的大小或是所处的分子大小范围，往往同时在样品邻近的泳道中加入已知分子量的DNA样品即标准分子量DNA (DNA marker)进行电泳。DNA marker可以用生物素进行末端标记，通过这种方式，杂交后的标准分子量DNA也能显影出条带。 

 


实验流程

1. 待测DNA制备；

2. 探针制备；

3. 琼脂糖凝胶电泳分离待测DNA样品； 

4. 凝胶预处理；

5. 转膜； 

6. 紫外交联；

7. 预杂交；

8. 杂交；

9. 洗膜；

10.放射性自显影检测； 

11.实验结果分析及报告；

 

相关要求(客户提供)：

1. 待检测目标基因序列和含有检测基因的阳性样品。

2. 高质量DNA样品至关重要，请确保DNA抽提质量，尽量采用进口试剂盒提取；基因组DNA检测：OD260/OD280=1.8-2.0，DNA总量不小于10ug，浓度>200ng/ul；提供基因组DNA检测图片，要求无降解，无蛋白污染；检测样品低温运输。

3. 客户如无法提供高品质的基因组DNA样品，本公司可以帮助制备可用于Southern Blot检测的DNA样品。

客户提供DNA提取样品要求如下：

1）菌液：>500ul，冰袋或者干冰运输

2）组织：>100mg，干冰运输

3）细胞：新鲜的细胞。

4. 基因组DNA酶切方案，如需要用到特殊限制性内切酶，需额外加收酶切费用或客户提供相应的限制性内切酶。


最终结果：

1. DNA样品检测报告(样品不返还)；

2. 具体实验流程报告；

3. Southern blot实验结果检测报告；

4. 原始图片及数据。