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项目 Pull-Down实验
服务内容 Pull-Down实验
服务周期 20-30工作日
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Pull-Down实验

原理:

蛋白-蛋白相互作用是蛋白质结构与功能研究中最重要的方面之一。GST pull-down原理是将靶蛋白与GST融合表达,并将蛋白固化在谷胱甘肽(GSH)亲和树脂上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当“诱饵蛋白”,目的蛋白溶液过柱,可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”(目的蛋白),洗脱结合物后通过电泳分析,从而证实两种蛋白间的相互作用或筛选相应的目的蛋白。"诱饵蛋白"和"捕获蛋白"均可通过细胞裂解物、纯化的蛋白、表达系统以及体外转录翻译系统等方法获得。此方法简单易行,操作方便。我们通过原核GST pull-down为您证明两目标蛋白质是否存在相互作用

 

实验流程:

1. 原核融合蛋白A(GST-A融合蛋白)的获得;

2. 真核融合蛋白B(cMyc-B融合蛋白)的获得;

3. 谷胱甘肽-琼脂糖树脂的处理;

4. 谷胱甘肽-琼脂糖树脂结合GST融合蛋白;

5. 预清除细胞裂解液

6. 探测细胞裂解液。

 


相关要求(客户提供):

1. 客户需要提供兴趣基因的质粒及序列相关信息;

2. 如需进行特异性WB检测,客户需提供特异性一抗。

 

最终结果:

1. SDS-PAGE 以及westem blot检测结果;

2. 构建得到的兴趣基因表达质粒;

3. 完整的实验报告及具体试验流程(包括:实验步骤;主要仪器及试剂说明(含仪器厂家、型号;试剂厂家、批号))

原始实验图片及数据。