产品简介：在碱性条件下，基于双缩脲反应，待测蛋白可将Cu2+还原为Cu+，Cu+进一步与BCA试剂反应，产生一种紫蓝色复合物。在波长为562nm处检测其吸收值，同时与标准曲线比对，即可计算出待测样品的蛋白浓度。BCA蛋白浓度测定因其简便、快速、灵敏及稳定性，目前已被科研人员广泛应用于蛋白质浓度测定。本试剂盒适用于微量蛋白质浓度的测定。若采用酶标板法，标准曲线的线性范围为0.5-450 μg/mL。若采用分光光度法，标准曲线的线性范围为0.5-300 μg/mL。

产品货号：NCTK18901

产品规格：200T/500T/2500T（188/358/1480）

产品特点：1. 适用于浓度比较低的蛋白质样品测定，检测浓度下限达到0.25μg/ml。2. 不受样品中去垢剂的影响。3. 检测蛋白质分子浓度的线性关系良好。

操作说明：

一. 酶标仪法  

1. 配制工作液：将B试剂和Cu试剂按照25:1体积配制成C试剂（两者充分混匀），将C试剂与A试剂按照1：1体积配制成工作液，充分混匀后放置室温备用（建议工作液室温放置不超过24小时）。

2. 分别将蛋白标准品0, 1, 2, 4, 6,8 , 10μL加入EP管中，分别用PBS补足至100μL体积。混匀后分别加入96孔板中（每个测定做3个平行）。

3. 稀释样品：取数个梯度稀释后的蛋白样品，使得终体积为100μL。将蛋白样品分别加入96孔板中。尽量让样品点落在标准线1/2后，以便尽可能减少误差。

4. 检测样品蛋白浓度：每孔加入100μL配制好的BCA工作液，混匀后60℃温育60min，冷却至室温，酶标仪测定A562nm吸光度，制作标准曲线，从曲线中求出样品浓度。

二. 分光光度计法

 1. 配制工作液：将B试剂和Cu试剂按照25:1体积配制成C试剂（两者充分混匀），将C试剂与A试剂按照1：1体积配制成工作液，充分混匀后放置室温备用（工作液配制的量要与测定所用的比色杯对应。每个测定要做3个平行。建议工作液室温放置不超过24小时）。

2. 稀释标准品：将BSA标准品用PBS 10倍稀释。分别将稀释后的标准品0, 2.5, 62.5, 125, 187.5，250μL加入EP管中，分别用PBS补足至250μL体积。标准曲线一般5-6个点即可。

3. 稀释样品：取数个梯度稀释后的蛋白样品，使得终体积为250μL。将蛋白样品分别加入EP管中。尽量让样品点落在标准线1/2后，以便尽可能减少误差。可参照下表的次序加入BSA标准品、样品及BCA工作液。

4. 检测样品蛋白浓度：每孔加入250μL配制好的BCA工作液，60℃温育60min，冷却至室温后分光光度计测定A562nm吸光度。绘制标准曲线，通过标准曲线计算样品的浓度。注意：实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。

标准曲线制作：在室温条件下，按说明书操作，对系列标准进行吸光度的测定，其数值及标准曲线如下(仅供参考)，我们分别采用 5、25、50、100、125μg/ml 的蛋白标准液绘制标准曲线。

注意事项：

1. BCA蛋白测定法测定蛋白浓度时，显色反应的速度和温度有关，且随着放置时间的延长，颜色也会逐渐加深，因此检测过程需保持温度与时间的恒定，以确保稳定性。

2. BCA试剂在低温环境中可出现结晶沉淀，37℃温育完全溶解后再使用。如发现细菌污染则应丢弃。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4.本试剂仅作科研用途。

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